Białko podobne do chitynazy w płucach i krążenie pacjentów z ciężką astmą cd

Minimalna granica wykrywalności testu YKL-40 wynosi 20 ng na mililitr. Oceniliśmy specyficzność testu ELISA YKL-40, potwierdzając, że przeciwciała wychwytujące i wykrywające nie wykazywały reaktywności krzyżowej z innymi ludzkimi chitynazami, w tym kwasową ssaczą chitynazą, YKL-39 i chitotriozydazą. Bronchoskopia światłowodowa i pobieranie próbek
Na Uniwersytecie Paryskim wykonano bronchoskopię, aby uzyskać próbki do analizy biochemicznej i immunohistochemicznej. Bronchoskopię wykonano tego samego dnia co puszczanie krwi zgodnie z wytycznymi Amerykańskiego Towarzystwa Klatki Piersiowej.15,16 Uczestniczący pacjenci z astmą nie mieli zaostrzenia w ciągu 2 miesięcy przed bronchoskopią. Płukanie oskrzelowo-pęcherzykowe wykonano przy użyciu 50 ml sterylnej soli fizjologicznej, a próbki natychmiast odwirowano (przy 150 x g przez 10 minut w temperaturze 4 ° C). Preparaty cytospin z peletek komórkowych utrwalano w acetonie przez 10 minut w temperaturze pokojowej. Cztery próbki oskrzelowo-biopsyjne pobrano z bifurkacji prawego środkowego lub dolnego płata, natychmiast zanurzono w związku Tissue-Tek (Sakura Finetek), zamrożono w ciekłym azocie i trzymano w temperaturze -80 ° C aż do przetworzenia.
Analizy immunohistochemiczne i morfometryczne
Serialowe 5-.m przekroje próbek oskrzelowo-biopsyjnych umieszczono na szklanych szkiełkach powlekanych .-metakryloksypropylotrimetoksysilanem (Sigma) i utrwalano w acetonie przez 10 minut w temperaturze pokojowej. Analizę immunohistochemiczną przeprowadzono w sposób opisany wcześniej16. Pierwotnym przeciwciałem było królicze przeciwciało anty-ludzkie YKL-40 (1 .g na mililitr) (MedImmune). Przeciwciała kontrolne to królicze IgG (DakoCytomation) i przeciwciało anty-YKL-40 koinkubowane z .g rekombinowanej ludzkiej kwasowej ssaczej chitynazy i chitotriozydazy na mililitr. Wtórne przeciwciało było skoniugowanym z biotyną przeciwciałem przeciwdziałającym. Detekcję przeprowadzono za pomocą kompleksu awidyna-alkaliczna fosfataza (Vector), szybko czerwony (DakoCytomation) i lekkiego kontrastowego barwnika hematoksyliny Mayera.
Liczbę komórek pozytywnych względem YKL-40 zliczano na milimetr sześcienny nabłonka oskrzeli i podnabłonka w przekrojach tkanek. Całkowitą powierzchnię biopsji (w milimetrach sześciennych) i grubość podnabłonkowej błony podstawnej określono za pomocą morfometrii i komputerowej analizy obrazu (Microvision Instruments). 16 Obszary biopsji były podobne u pacjentów z łagodną astmą, u osób z umiarkowaną astmą , osoby z ciężką astmą i kontrolne (mediana, 0,433 do 0,496 mm2, P = 0,40 w teście Kruskala-Wallisa). Pomiary immunohistochemiczne wykonywano przy powiększeniu 400, a całkowity obszar biopsji i grubość podnabłonkowej błony podstawnej oceniano przy powiększeniu 60.
Analiza statystyczna
Analizy przeprowadzono przy użyciu oprogramowania SPSS w wersji 6.1.3 lub MedCalc. Porównaliśmy charakterystykę osobników za pomocą testu Kruskala-Wallisa i testu chi-kwadrat Pearsona. Proste skojarzenia oceniano za pomocą analizy rangowej korelacji Spearmana. Poziomy YKL-40 nie były normalnie rozmieszczone i dlatego zostały przekształcone logarytmicznie
[patrz też: zdrowie po łacinie, przegladarka skierowan nfz, pou u laryngologa ]